兔場實驗室細菌培養(yǎng)技術(3)

2017-07-29

(3)穿刺接種法:本法適用于半固體、固體培養(yǎng)基以及微量發(fā)酵管的接種,用來做細菌的生化和動力學實驗。沿培養(yǎng)管中心直刺至距管底約0.5厘米處,然后再沿穿刺線退出接種針。

(4)液體培養(yǎng)基接種法:方法基本同斜面接種法,將接種環(huán)在培養(yǎng)管壁的液面下摩擦,然后再在液體中振動幾次,塞好塞子。注意塞子和管口的滅菌操作。

3.細菌培養(yǎng)方法

細菌的培養(yǎng)方法根據(jù)細菌的生長特性、培養(yǎng)目的、要求等不同而不同。主要分為以下幾種:

(1)需氧培養(yǎng)法:即一般培養(yǎng)法。細菌接種培養(yǎng)基后,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)即可。適用于需氧菌及兼性厭氧菌的分離培養(yǎng)。

(2)二氧化碳培養(yǎng)法:某些細菌要在一定的二氧化碳環(huán)境中才能良好生長。

①燭缸法:將接種的培養(yǎng)基置于干燥器內(nèi),點燃蠟燭后,密封好,連同容器一起置溫箱中培養(yǎng)。

②化學法:每升容器中按照碳酸氫鈉0.4克,鹽酸3.5毫升的比例,分別裝入兩個小容器中,置于干燥器中,密封后使兩藥接觸產(chǎn)生二氧化碳。

③二氧化碳培養(yǎng)箱法:將培養(yǎng)基置于特制的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),可以根據(jù)需要調節(jié)二氧化碳的濃度。

(3)厭氧培養(yǎng)法:

①換氣法:將培養(yǎng)基放入干燥器內(nèi),將干燥器內(nèi)抽成真空,然后充入氮氣、氫氣和二氧化碳的混合氣體,放人溫箱中培養(yǎng)。

②焦性沒食子酸法:焦性沒食子酸在堿性溶液中形成焦性沒食子酸鹽,可以吸收空氣中的氧氣,從而造成無氧的環(huán)境,適合厭氧菌生長。培養(yǎng)方法:將平皿去蓋翻轉,放置焦性沒食子酸1克,再覆上一層脫脂棉,在脫脂棉上滴加I0%的氫氧化鈉1毫升,然后將接種好的平皿覆蓋在翻轉的蓋上,迅速用蠟封固,置37℃溫箱中培養(yǎng)2-4天,觀察結果。接種的培養(yǎng)基如果是試管,可取大試管一支,底部放焦性沒食子酸2克,并加玻璃珠10多粒,將培養(yǎng)基試管放在玻璃珠上,再沿大試管壁滴加10%氫氧化鈉溶液2毫升,將大試管口用橡皮塞塞緊,置37℃溫箱中培養(yǎng)。

③厭氧肝片肉湯接種:因肝片或肉渣內(nèi)含有谷胱甘肽,可發(fā)生氧化反應而降低環(huán)境中的氧化勢能,以利于厭氧菌的分離。接種方法是用接種環(huán)鉤取病料,接種于培養(yǎng)基中,在37℃溫箱中培養(yǎng)2-4天,觀察結果。

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