制作白僵蠶,首先必須具備養(yǎng)殖的蠶源和白僵菌的菌種,然后才可以分離培養(yǎng)和按種,從而制出僵蠶。
(1)取得白僵菌種:白僵菌可以向有關(guān)單位引種,也可以自己選擇性地分離培養(yǎng)。分離方法是:選擇病死后比較僵硬,體節(jié)凹陷處或全身覆蓋有白色粉狀物或毛狀物的僵蠶,進行培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)。分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基可選擇馬鈴薯洋菜培養(yǎng)基。配制培養(yǎng)基時可以先將洗凈的馬鈴薯200克放置0.1%的升汞液中浸30分鐘。再洗凈去皮,切成方塊裝入燒瓶內(nèi),加清水1千毫升,煮成汁水過濾。加入15-20克洋菜于汁水中,并加熱使洋菜溶解。然后加入20克葡萄糖,過濾,將濾液裝入試管內(nèi)進行高壓滅菌消毒30分鐘。取出后使其凝成斜面即可。培養(yǎng)基制備后,可在酒精燈火焰旁打開斜面試管棉塞,把僵蠶投入試管內(nèi)塞上棉塞,然后搖動試管,使僵蠶體表的白僵菌孢子或菌絲沾附于培養(yǎng)基斜面上。再在火焰旁打開試管棉塞取出僵蠶,塞好棉塞,放置25-28℃的地方培養(yǎng)。既要通氣又要保持一定溫度,才能適宜白僵菌的生長繁殖。一般培養(yǎng)三天半就可長好,慢的約需十余天才能長好。在培養(yǎng)過程中,同時可選擇白僵菌菌株長勢較好的斜面,再用接種針轉(zhuǎn)接到其他試管擴大培養(yǎng)。
(2)接種:白僵菌種培養(yǎng)好,就可接種于蠶體。蠶體以五齡幼蠶(吐絲作繭前的熟蠶)進行接種為好。接種可分穿刺法和噴撒法兩種。
穿刺法:用培養(yǎng)基菌種2份加無菌水1份調(diào)成懸濁液,裝入小皿中,用7號縫衣針醮取懸濁液,在蠶體后部9-10環(huán)節(jié)間榻皺處,輕輕剌一下,以刺破皮為度。要逐條進行接種。操作過程中必須注意徹底消毒,避免感染雜菌。為了保證接種質(zhì)量,懸浮菌液要勤換,做到穿刺一條醮一下菌液,直到穿刺完畢。
噴撒法:選擇3-15條僵蠶,浸于1000毫升的無菌水中,使僵蠶的白僵菌孢子全部脫落于水中,調(diào)成均勻的懸浮液。用噴霧器噴灑在五齡蠶體上.每匾約噴撒200毫升左右。噴撒時要注意均勻,不要遺漏。調(diào)制的懸浮液要立即使用,不要超過6小剛,以免失效。噴灑完后飼喂桑葉,24小時內(nèi)要保持多濕狀態(tài),方能提高感染率。